1.官能團(tuán)解離與電荷吸附

　　陰離子交換柱的固定相上共價(jià)結(jié)合了帶正電荷的官能團(tuán)。根據(jù)電荷狀態(tài)是否隨pH變化，可分為強(qiáng)陰離子交換劑（如季銨基團(tuán)）和弱陰離子交換劑（如二乙氨乙基）。強(qiáng)陰離子交換劑在寬的pH范圍內(nèi)始終保持帶正電，而弱陰離子交換劑僅在特定pH范圍內(nèi)才離子化。

　　當(dāng)樣品通過處于平衡狀態(tài)（與特定pH和離子強(qiáng)度的緩沖液平衡）的色譜柱時(shí)，表面帶負(fù)電荷的目標(biāo)分子會與固定相上帶正電荷的官能團(tuán)通過靜電引力結(jié)合，從而被保留在柱上。不帶電荷或帶正電荷的雜質(zhì)則不被保留，直接從柱中流出。

　　2.離子交換與競爭置換

　　目標(biāo)分子被吸附后，其與固定相的結(jié)合強(qiáng)度取決于分子本身所帶的凈電荷數(shù)量。電荷越多，結(jié)合越緊密。要實(shí)現(xiàn)分離，就需要打破這種結(jié)合平衡。

　　3.梯度洗脫實(shí)現(xiàn)分離

　　要依次釋放這些結(jié)合的目標(biāo)分子，常用的方法是梯度洗脫。即逐漸增加流動相中鹽的濃度。鹽離子會與吸附在固定相上的目標(biāo)分子競爭結(jié)合位點(diǎn)。隨著鹽濃度升高，越來越多的目標(biāo)分子被鹽離子置換下來，重新進(jìn)入流動相。

　　由于不同分子帶電荷數(shù)不同，與固定相的親和力各異，因此在鹽濃度梯度上升的過程中，結(jié)合力較弱的分子會先被洗脫，而結(jié)合力強(qiáng)的分子則在較高鹽濃度時(shí)才會被洗脫出來，從而實(shí)現(xiàn)按電荷差異的分離。